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"Courage petite sœur. Fais un voeu chaque fois que tu pleures. Redresse-toi au lieu d'avoir peur. Quelqu'un t'attend là-bas. Souris petite sœur. Même quand tu as envie d'avoir peur. Le bonheur est tout près, il existe. Quelqu'un t'attend là-bas. Garde toujours une prière dans ta poche. Et tu y verras plus clair. Ne t'en fais pas, la nuit s'en va. Ne vois pas le monde à l'envers. Confiance petite sœur. Tes espoirs seront réalité. Il te faut du courage petite sœur. Quelqu'un viendra pour t'aimer…" Voici ce que l’on chantait à la petite Penny dans le film.

Une jeune orpheline nommée Penny a été kidnappée et enfermée dans un bateau à aube abandonné du Bayou du Diable. Un jour, elle jette à la mer une bouteille contenant un message de détresse et qui est découverte par la SOS Société, une organisation internationale de souris qui a élu domicile dans les caves du bâtiment des Nations unies. Miss Bianca, une souris blanche déléguée de Hongrie, se porte volontaire au secours de Penny. Après un temps d'hésitation, le président de la SOS Société suggère de lui adjoindre un coéquipier. Ne sachant qui choisir entre les différents délégués masculins prêts à l'accompagner, Bianca choisit finalement à la surprise générale Bernard, le concierge balbutiant atteint de triskaïdékaphobie (peur du chiffre treize). Le duo se rend d'abord à l'endroit auquel la lettre était destiné : l'orphelinat Clair Matin où vivait Penny et y rencontre un vieux chat nommé Rufus. Il leur apprend que les autorités humaines ont renoncé à rechercher l'orpheline, considérant sa disparition comme une fugue à cause du fait qu'elle pensait ne jamais pouvoir être adoptée. Il mentionne également Mme Médusa, qui avait tenté d'entrainer un jour Penny dans une combine louche. Bien qu'estimant que cette piste ne peut mener nulle part, il donne aux souris l'adresse du magasin de prêt-sur-gage. Sur place, Bernard et Bianca surprennent une conversation téléphonique entre Médusa et son associé Snoops. Ils apprennent que les deux compères sont bien les ravisseurs de Penny qu'ils séquestrent au Bayou du Diable et qu'ils sont à la recherche du plus gros diamant du monde, l’Œil du Diable.

Face à l'incompétence de Snoops à empêcher Penny d'envoyer des messages dans des bouteilles, Médusa décide de les rejoindre. Bernard et Bianca tentent de l'accompagner discrètement mais sont expulsés de la voiture pendant le trajet jusqu'à l'aéroport à cause de la conduite irresponsable de Médusa. Grâce à un albatros du nom d'Orville, les deux souris parviennent finalement jusqu'au bayou alors que Penny est en train de faire une nouvelle tentative d'évasion à travers les marécages. Les deux équipiers se lient d'amitié avec Annie Bouée et son mari Luke, exaspérés comme la majorité des habitants du bayou par la présence de Médusa et proposent leur aide et celle de leurs voisins. Le groupe voit alors que Penny a été rattrapée par Néron et Brutus, les crocodiles de Médusa. Avec l'aide de la libellule Evinrude, Bernard et Bianca prennent non sans difficultés les reptiles en filature et localisent ainsi le bateau où Penny est détenue. Les deux souris surprennent une discussion qui leur apprend que Penny a été kidnappée car sa petite taille lui permet de passer l'étroit passage donnant sur une grotte où est caché l’Œil du Diable.

Après avoir été pourchassés par les deux crocodiles, Bernard et Bianca trouvent Penny et préparent un plan d'évasion avec elle tandis qu'Evinrude alerte les locaux qui se sont réunis chez Annie et Luke en attendant leur signal. Mais Evinrude est retardée par un groupe de chauves-souris en chasse et doit se cacher. Le lendemain matin, Médusa et Snoops emmènent Penny dans la caverne où se trouve l'Œil. Pour la forcer à récupérer le diamant, Médusa garde avec elle son ours en peluche. Bernard et Bianca sont cachés dans la poche de la jupe de la jeune fille que Snoops fait descendre dans la grotte. Ensemble, ils arrivent à trouver la pierre précieuse, dissimulée dans le crâne de l'un des pirates morts dans cette grotte. Toutefois, le crâne est fermement coincé dans la roche et l'eau est montée dangereusement durant leurs recherches. Malgré les supplications de Penny, apeurée par la marée, Médusa refuse de la faire remonter. La fillette utilise un sabre pour entrouvrir la mâchoire du crâne pendant que les souris essayent de le sortir depuis l'intérieur. Ils parviennent in extremis à récupérer le diament et arrivent à rejoindre tant bien que mal la sortie.

À sa sortie de la grotte, Penny est interceptée par Snoops et Médusa. Cette dernière souhaitant duper son comparse, prend le diamant et le cache dans l'ours en peluche. De retour au bateau, elle pointe un fusil sur son associé et Penny afin de les empêcher de la suivre. Mais en s'enfuyant, elle trébuche sur un câble tendu par Bernard et Bianca et fait tomber l'ours. Penny récupère sa peluche et s'enfuit en courant. Les animaux du voisinage, enfin prévenus, arrivent alors au bateau et aident les souris à emprisonner les deux crocodiles. Ensuite, ils allument les feux d'artifices que Snoops stockait sur le bateau pour localiser Penny lors de ses tentatives d'évasion nocturnes, augmentant le chaos et faisant sombrer le bateau sous les eaux du bayou. Pendant ce temps, les souris et Penny arrivent à voler l'hydroglisseur artisanal de Médusa. Cette dernière tente en vain de les poursuivre en utilisant ses crocodiles comme des skis nautiques mais finit accrochée à l'une des cheminées du bateau tandis que les deux sauriens irrités par la manœuvre essayent de l'attraper, le tout sous le regard moqueur de Snoops qui s'éloigne sur un radeau de fortune.

De retour à New York, la SOS Société regarde un reportage sur la découverte par Penny du diamant de l’Œil du Diable qui a été offert à la Smithsonian Institution et sur l'adoption de la jeune fille. La réunion est interrompue par Evinrude qui survient avec un appel à l'aide qui amène Bernard et Bianca vers une nouvelle aventure...

29eme long-métrage de Walt Disney, sortie en 1977, Les aventures de Bernard et Bianca est considéré comme l’un des grand classique de Disney.

Le film est une grande réussite et l’un des plus connus et plus diffusé de Disney. Le succès est tel que le nombre d’entrée au cinéma bat tous les films d’animations sortis avant lui et ne sera battu qu’une dizaine d’année plus tard. La série a plu au publique car il associe un scénario imaginatif avec des petites souris qui sauvent des humains. Les auteurs ont associé l’humour avec les personnages secondaire drôle (les animaux des marais, Orville et ses décollages ou encore Evinrude), et une ambiance plus sombre (Penny une orpheline toujours triste, les marais horrifique et Médusa). Le succès surprend les studio Disney car il n’attendais rien du film et n’avait pas beaucoup investi d’argent mais avec l’argent gagné Disney renfloua ses caisses et lui permis de produire d’autres films comme Rox et Rowky et Taram et le chaudron magique (ce dernier fut le plus gros bide de Disney). Le film sera nominé aux Oscar en 1978 pour l'Oscar de la meilleure chanson originale pour Someone's Waiting for You. Il faut noter que la méchante prévu au début n’était pas Médusa mais Cruella d’Enfer avant que les studios ne changent heureusement d’avis.

La film malgré les années reste un rêve à regarder aussi bien pour les plus jeunes qui l’a découvre que pour les adultes.